發酵過程常見工(gōng)業(yè)葡萄糖檢測方法,如菲林滴定法、氧(yǎng)化酶一偶聯比(bǐ)色(sè)法(fǎ)(GOD POD法) 、氣相色譜(pǔ)法 、高效液相色譜法,旋光(guāng)法、生物傳(chuán)感器法。
菲林(lín)滴定法
原理:還原(yuán)糖可以將菲林試劑(jì)中(zhōng)的二價銅(tóng)離子還原為一價銅離子,反應終點可以 由次甲基蘭指示(藍色(sè)消失形成磚紅(hóng)色),根據一定量的菲林試劑完全還原所需(xū)的還原糖量,可計算加入樣品(pǐn)中的還原糖的(de)含量。
1.試劑 菲林試劑甲液(yè):稱取69.3g硫酸銅晶體,用蒸餾水溶解,定容至1000ml 菲林試劑乙液(yè):稱取346g酒石酸鉀鈉,100g氫氧化鈉,用蒸餾水溶解(jiě)定(dìng)容至1000ml 次甲基藍溶液:1g次甲基藍溶於100ml水
2.儀器 水浴鍋。
特點:手工操作,過(guò)程複雜,受到多種因(yīn)素幹擾,但是成本較低,所以目前仍為多數企業采用。
通過原理可以分析(xī)出本方法檢測結果其實是(shì)還原糖,而非絕對的葡萄糖(táng)量。
氧化酶一偶聯比色法
GOD-POD法即葡萄糖氧化酶法,可以用來測(cè)定葡(pú)萄糖(táng)。葡萄(táo)糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸,並釋放過氧化(huà)氫。過氧化物酶(peroxidase,POD)在色原(yuán)性氧(yǎng)受體存在時將(jiāng)過氧化氫分解為水和氧,並使色原性氧受體
4-氨基安替比林和酚去氫(qīng)縮合(hé)為紅色醌類化合物,即Trinder反應。紅色醌類化合物的生(shēng)成量與葡萄(táo)糖含量成正比。這一方法目前在臨床上用於診斷糖尿病。由於可(kě)自動化操作(zuò),因此未(wèi)來(lái)也可能應用於發酵液的檢測(cè)。
HPLC法
莫海濤等建立了同時測定葡萄糖(táng)、蔗糖、麥芽糖和乳糖的高效液(yè)相色譜方法。樣品經水超(chāo)聲波浸取,采用Hypersil NH2柱分離,流動相為乙晴/水(二者體積(jī)比為(wéi)80:20),用激光蒸(zhēng)發(fā)光散射檢測器檢測。結果表明(míng):四者的線性範圍分別為15~1 000,20 --1500,15~1000,12~1 000mg/L,檢出限為4.5~6.0 mg/L,樣品的加標平均回收率(lǜ)為92.9%~99.0%,相對標準偏差為1.9%~3.5%。與前者相比,HPLC檢測的準確度和專一性更高。
旋光度法
在葡萄(táo)糖濃(nóng)度與旋光度(dù)值的線性關係的考察中,精密稱取適量經(jīng)98~100℃幹燥至恒重(chóng)的純葡萄糖,加水溶(róng)解並稀釋,按照旋光光度法(fǎ)測定,旋光度(dù)a對濃度C回歸,得到的(de)回歸方程。結(jié)果表明:當葡萄糖質量濃度為15.58~103.84 g/L時,具有良好的線性 關係。
生物傳感器法
葡萄糖生物傳(chuán)感器的工作原理如下:葡萄糖首(shǒu)先在GOD催化作用下生成過氧化氫,過氧(yǎng)化氫在過氧化物(wù)酶(HRP)的催化作用下,將2價還原態(tài)電介質Os氧化成Os3+,氧化態電介質Os3+在較低工作電(diàn)壓(yā)下被還原,產生的(de)還原電流與被測葡萄糖濃度呈線性關 係,通過(guò)檢測還原電流即可得到對應葡萄糖(táng)濃(nóng)度。
氣相色譜法
采用氣相色譜分析萄萄糖等多羥基化合物時,由(yóu)於(yú)多羥基(jī)化合物(wù)極性大、沸點高,直接進樣分析無法進行,所以多采(cǎi)用矽醚化試劑與羥基(jī)反(fǎn)應,生成易揮發(fā)、低極性、高穩定性的三甲基矽醚衍生物,再進行(háng)氣相色譜分析。



