發酵過程常見工(gōng)業葡萄糖檢測方(fāng)法,如菲林滴定法、氧化酶一偶聯比色法(GOD POD法) 、氣相(xiàng)色譜(pǔ)法 、高效液相色譜法,旋光法、生物傳感器法。
菲(fēi)林滴定法
原理:還原糖可以(yǐ)將菲林試劑中的二價銅離子還原為(wéi)一(yī)價銅離子,反(fǎn)應終點可以 由次甲基蘭指示(藍色消失形成磚紅色),根據一定量的菲林試劑完全還原所需的還原糖(táng)量,可計(jì)算加入樣品(pǐn)中的還(hái)原糖的含量。
1.試劑 菲林試劑甲液:稱取(qǔ)69.3g硫酸銅晶體,用蒸餾水溶解,定容至1000ml 菲(fēi)林試劑乙液:稱取346g酒石(shí)酸鉀鈉,100g氫氧化鈉,用蒸餾水溶解定容至1000ml 次甲基藍溶(róng)液:1g次甲基藍溶於100ml水
2.儀器 水浴(yù)鍋。
特點:手工操作,過程複雜,受到多種因素幹擾,但(dàn)是成本較低,所以目前仍為多數企業采用。
通過原理可以分析出本方法(fǎ)檢測結果其實(shí)是還原糖(táng),而非絕對的葡萄糖量。
氧化酶一偶(ǒu)聯比色法
GOD-POD法即葡萄(táo)糖氧化酶法,可以用來測定(dìng)葡萄糖。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡(pú)萄糖酸,並釋放過氧化氫。過氧化(huà)物酶(méi)(peroxidase,POD)在(zài)色原性氧受體存在(zài)時將過氧化(huà)氫分解為水和氧,並使(shǐ)色原性氧受(shòu)體 4-氨基(jī)安替比林和酚去氫縮合(hé)為紅(hóng)色醌類化合物,即Trinder反應。紅色醌類化合(hé)物的生成量與葡萄糖含量成正比。這一方法目前在臨床上用於診斷糖(táng)尿病。由(yóu)於可自動(dòng)化操作,因此未來也可能(néng)應用於發(fā)酵液的檢測。
HPLC法
莫海濤等建立了同時測定葡(pú)萄糖、蔗糖(táng)、麥芽糖和乳糖的高效液相色譜方法。樣品經水超聲波浸取,采用Hypersil NH2柱分離,流動相為乙晴/水(二(èr)者體積比為80:20),用激光蒸發光散射檢測器檢測(cè)。結果表明:四者的線性範圍分別為15~1 000,20 --1500,15~1000,12~1 000mg/L,檢出限為4.5~6.0 mg/L,樣品的加標平均回收率為92.9%~99.0%,相對標準偏(piān)差為1.9%~3.5%。與前者相比,HPLC檢測的(de)準確度和專一性更高(gāo)。
旋光度法
在葡萄糖濃度與旋(xuán)光度值的線性關係的考察中,精密稱取適量經98~100℃幹燥至恒重的純葡萄糖,加水溶解並(bìng)稀釋,按照旋光光度法測定,旋光度a對濃度C回歸,得到的回歸方程。結(jié)果表明:當葡(pú)萄糖質量濃度為15.58~103.84 g/L時,具有良好的線(xiàn)性 關係。
生物傳感器法
葡萄糖生物傳感器的工作原理如下:葡萄糖首先在GOD催化(huà)作用下生成過氧化(huà)氫,過(guò)氧化氫在過氧化(huà)物酶(HRP)的催化作用下,將2價還原態電(diàn)介質Os氧化成Os3+,氧化態電介質Os3+在較低工作電壓下被還原,產生的還原電(diàn)流與被測葡萄糖濃度呈線性關 係,通過檢測還原電流即(jí)可得到對應(yīng)葡(pú)萄(táo)糖濃度。
氣相色譜法
采用氣相色譜分析萄萄(táo)糖等多羥基化合物時,由於多羥基化合物極(jí)性大、沸點高,直接進樣分析(xī)無法進行,所(suǒ)以多采用矽醚(mí)化試劑與羥基反應,生成易揮發、低極性、高穩定性的三甲基矽醚衍生物,再進行氣相色譜分析。



