發酵過程常見工業葡萄糖檢測(cè)方法,如菲林滴定法、氧化酶一偶聯比色法(GOD POD法) 、氣相色譜法 、高效液(yè)相色譜法,旋光法、生物傳感器法。
菲林(lín)滴定法
原理(lǐ):還原(yuán)糖可以將菲林(lín)試劑中的二(èr)價銅離子還原(yuán)為一(yī)價銅離子,反(fǎn)應終點可以 由次甲基蘭指示(藍色消失(shī)形成磚紅色),根據一定量的(de)菲林試劑完全還原所需的還原糖(táng)量,可計(jì)算加入樣品中的還原糖的含量。
1.試劑 菲林(lín)試劑甲液:稱取69.3g硫酸銅晶(jīng)體,用蒸餾水溶解,定容至1000ml 菲林試劑乙液:稱取346g酒石酸鉀鈉,100g氫(qīng)氧化鈉,用蒸餾水溶解定(dìng)容至1000ml 次甲基藍溶液:1g次甲基藍溶於100ml水
2.儀器 水浴鍋。
特點:手工操作,過程複雜,受到多種因素幹擾,但(dàn)是成(chéng)本較低,所以目前仍為多數企業采用。
通過原理可以分析出本方法檢(jiǎn)測結果其實是還原糖(táng),而非絕對的葡萄糖量。
氧化酶一偶(ǒu)聯比色(sè)法
GOD-POD法即葡萄糖氧化酶法,可以(yǐ)用來測定葡萄糖。葡萄(táo)糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用(yòng)氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸(suān),並釋放過氧化(huà)氫(qīng)。過氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受體存(cún)在時將過氧化氫分解為水和氧,並使(shǐ)色原性氧受體
4-氨基(jī)安替比林和(hé)酚去氫縮合為紅色醌類化(huà)合物,即Trinder反應。紅色醌(kūn)類化合物的(de)生成量與葡萄糖含量成正比。這一方法(fǎ)目前在臨床上用於診斷糖尿(niào)病。由於可自動化操作,因此未來也可能應用於發酵(jiào)液的檢測。
HPLC法
莫(mò)海濤等建立了同時(shí)測定葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖的高(gāo)效液相色譜方法。樣品經水超聲波浸取,采用Hypersil NH2柱(zhù)分(fèn)離,流動相為乙晴/水(二者體積比為80:20),用激光蒸(zhēng)發光散射檢測器(qì)檢測。結果表明:四者的(de)線性範(fàn)圍(wéi)分別為15~1 000,20 --1500,15~1000,12~1 000mg/L,檢出限為4.5~6.0 mg/L,樣品的加標平均回收率為92.9%~99.0%,相對(duì)標準偏差為1.9%~3.5%。與前者相(xiàng)比,HPLC檢測的準確度(dù)和專一性(xìng)更高。
旋光度法
在葡萄糖濃度與旋光度值的線性關係(xì)的考察(chá)中,精密稱取適量經98~100℃幹燥(zào)至恒重的純葡萄糖(táng),加水溶解並稀釋(shì),按照旋光光度法測定,旋光度a對濃度(dù)C回歸,得到的回(huí)歸方程。結果表(biǎo)明:當葡(pú)萄糖質量濃度為15.58~103.84 g/L時,具有良好的線性 關係。
生物傳感器法
葡萄糖(táng)生物傳感器的工作原理如下:葡(pú)萄糖(táng)首先在(zài)GOD催化(huà)作用下生成過氧化氫,過氧化氫在過氧化物酶(HRP)的催化作用下,將(jiāng)2價還原態電介質Os氧化成Os3+,氧化(huà)態電(diàn)介質Os3+在較(jiào)低工作(zuò)電壓下被還原,產生的還(hái)原電流(liú)與被測葡萄糖濃度呈線性關 係,通過檢測還(hái)原電流即可得到(dào)對應葡萄糖濃度。
氣相色譜法
采用氣相色譜分析萄萄糖等多羥基化合物時,由於多羥基化合物(wù)極(jí)性大、沸點高,直接進樣分析無法進行,所以多(duō)采用(yòng)矽醚化試劑與羥基反應,生成易揮發、低(dī)極性、高(gāo)穩定性的三甲基矽醚衍生物,再進行氣相色譜分析。



